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果膠裂解酶(pectinate lyases,PL)試劑盒

簡要描述:果膠裂解酶(EC4.2.2.10)是果膠酶的重要組成部分,是一種能降解植物細(xì)胞壁,導(dǎo)致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶,來源比較廣泛,主要來源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高水果出汁率,植物病毒的純化,紙漿的漂白和紡織品的生物精煉,在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。果膠裂解酶(pectinate lyases,PL)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)。

  • 更新時(shí)間:2024-06-29
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:2010

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詳細(xì)介紹

品牌YLKBIOCAS詳見說明書
分子式詳見說明書純度詳見說明書
分子量詳見說明書貨號(hào)YLK-SH103
規(guī)格100管/48樣、50管/24樣供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
測試方法:微量法、紫外分光光度法

果膠裂解酶(pectinate lyases,PL)試劑盒說明書

                                          微量法100T/48S

 

    意:正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

果膠裂解酶(EC4.2.2.10)是果膠酶的重要組成部分,是一種能降解植物細(xì)胞壁,導(dǎo)致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶,來源比較廣泛,主要來源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高水果出汁率,植物病毒的純化,紙漿的漂白和紡織品的生物精煉,在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

 

測定原理:

果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵,生成在還原端C4C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸,在235nm處有特征吸收峰。

 

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、恒溫水浴鍋。

 

試劑組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體6mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體6mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體6mL×1瓶,4℃保存。

 

酶液提?。?/span>

1.組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2.細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

3. 培養(yǎng)液:直接測定。

測定操作表:

1、   分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至235nm,蒸餾水調(diào)零。

2、   操作表


對(duì)照管

測定管

試劑一(μL


120

試劑二(μL

120


40℃溫育3min

酶液(μL

20

20

混勻,40℃反應(yīng)30min

試劑三(μL

60

60

混勻于微量石英比色皿/96孔板UV板)測定235nm處吸光值A,△A=A測定管-A對(duì)照管。

 

酶活性計(jì)算公式:

a.        用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

1. 組織中PL活性

1)按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義:40℃,pH5.5條件下,每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性(nmol/min/mg prot= ε×d×V反總÷V×Cpr÷T

= 64.1×A÷Cpr

2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義:40℃,pH5.5條件下,每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性(nmol/min/g 鮮重)= ε×d×V反總÷V×W÷V樣總)÷T

= 64.1×A÷W

2. 細(xì)菌、真菌PL活性

酶活性定義:40℃,pH5.5條件下,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性(nmol/min/104cell= A ÷ε×d×V反總÷V×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)÷T

 = 64.1×細(xì)胞數(shù)量

3. 培養(yǎng)液PL活性

酶活性定義:40℃,pH5.5條件下,每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性(nmol/min/mL= ε×d×V反總÷V÷T

= 64.1×A

ε:不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù):5200L/mol/cmd:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,30min

 

b.       96孔板測定的計(jì)算公式如下

1. 組織中PL活性

1)按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義:40℃,pH5.5條件下,每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性(nmol/min/mg prot= ε×d×V反總÷V×Cpr÷T

= 128.2×A÷Cpr

2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義:40℃,pH5.5條件下,每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性(nmol/min/g 鮮重)= ε×d×V反總÷V×W÷V樣總)÷T

= 128.2×A÷W

2. 細(xì)菌、真菌PL活性

酶活性定義:40℃,pH5.5條件下,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的

 

酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性(nmol/min/104cell=ε×d×V反總÷V×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)÷T

    = 128.2×細(xì)胞數(shù)量

3. 培養(yǎng)液PL活性

酶活性定義:40℃,pH5.5條件下,每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性(nmol/min//mL= ε×d×V反總÷V÷T

= 128.2×A

ε:不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù):5200L/mol/cmd:比色皿光徑,0.5cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mLW,樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時(shí)間,30min

果膠裂解酶(pectinate lyasesPL)試劑盒僅供科研!

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