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尿酸(Uric Acid, UA)含量測定試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/11/8      點擊次數(shù):1364

尿酸(Uric Acid, UA)含量測定試劑盒說明書


微量法 100T/96S


注 意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。


測定意義:


UA 是鳥類和爬行類動物的主要代謝產(chǎn)物,正常人體尿液中產(chǎn)物主要為尿素,含少量尿酸。此外,UA 還是重要的抗氧化劑,能清除超氧化物,羥自由基等。體內(nèi) UA 生成量和排泄量不平衡會導致多種疾病的發(fā)生。例如,血中 UA 升高會引起痛風、腎功能損害和動脈硬化,相反 UA 降低會引起惡性貧血,在臨床診斷上具有重要的意義。



測定原理:


尿酸酶能催化 UA 生成尿囊素,CO2 及 H2O2,H2O2 氧化亞鐵氰hua鉀中的 Fe2+ 生成 Fe3+ ,F(xiàn)e3+進一步與酚和 4-氨基安替比林縮合生成紅色醌類化合物,在 505nm 下有特征吸收峰,測定反應體系 505nm 的吸收值,可計算尿酸的含量。



自備實驗用品及儀器:


恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。



試劑組成和配制:


緩沖液:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。


試劑一:


A:用于標準管和測定管,粉劑 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 13mL 緩沖液溶解。


B:用于空白管,粉劑 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 7 mL 緩沖液溶解。


試劑二:粉劑 1 管,4℃避光保存,使用前加 2mL 蒸餾水溶解,60℃加熱溶解。



樣品的制備:


1.        動植物組織:建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 生理鹽水或蒸餾水,進行冰浴勻漿,然后 8000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。


2.        血清,培養(yǎng)液:直接檢測。


測定操作表:


1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 505nm。


2、 操作表


標準管

空白管

測定管





試劑一(μL)

A, 60

B, 60

A, 60





H2O(μL)

180

240

180





試劑二(μL)

60







樣品(μL)



60






混勻,37℃水浴 30min,取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中,測定 505nm 處各管吸光值,標準管和空白管只需做一管。


UV 含量計算公式:


1.    組織:


(1)按樣本重量計算


尿酸含量(μmol/g 鮮重)=C 標準品×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)÷(W÷V樣總)=0.5×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W

(2)按樣本蛋白濃度計算


尿酸含量(μmol/mg prot)=C 標準品×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)÷ Cpr =0.5×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)÷Cpr


尿酸(μmol/L)= C 標準品×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)×103 =500×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)


C   標:標準品濃度 0.5μmol/mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣品質(zhì)量,g ;Cpr:


樣本蛋白濃度,mg/mL;103  :1μmol/ L=103μmol/ mL


注意事項:


1.    血清樣本請在 24 小時內(nèi)測定,或者 4℃密封避光保存不超過 72 小時。


2.    吸光值大于 0.8 可用蒸餾水稀釋樣本,并在計算公式中算入稀釋倍數(shù)。


3.    z低檢出限為 10μmol/L。




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